免费看日产一区二区三区,91精品免费久久久久,久久精品一区二区三区中文字幕,亚洲精品久久久久中文字幕一区 ,亚洲国产第一区二区三区四区,久久99精品久久久手机免费,日本高清不卡一区二区51,一区二区三区福利视频

天歲生物 · 更懂國人更放心

IT IS MORE REASSURING TO KNOW THE CHINESE PEOPLE

當臨床應用干細胞治療時,選擇哪個代次的干細胞治療更加合適,是經常容易被問及的。這些都是應該思考和有待解決的問題。我們都是知道,人分男女老少,而干細胞也有年輕和衰老之分,因此,細胞的代數是影響干細胞活性及臨床有效性、安全性的一個重要因素

理論上講,細胞代數越靠前,干細胞的干性也越強。但是干細胞在體外培養的過程中,干細胞有從組織微環境到體外培養環境的一個調整和適應過程,一部分不適應的細胞會被淘汰,所以在前兩三代,干細胞基因組有著不穩定的因素,可能不宜臨床應用。

有研究顯示,通過核型分析發現,在前三代細胞中,干細胞存在異常核型的比例偏高。就如間充質干細胞(MSC)而言,臨床應用的最佳代數應該在 4~6 代。

目前臨床研究中,MSC 應用較為常見的來源骨髓、脂肪、臍帶、胎盤等,本文以臍帶、脂肪、胎盤這三類比較常見的來源進行總結,針對不同來源間充質干細胞,體外傳代培養后不同代次的一些生物學特性的變化(例如:細胞形態、細胞周期檢測、表面標記物檢測、染色體核型分析、相關基因表達及細胞因子的定量分析),因可供參考資料有限,不足之處請諒解。

1669598473580.png

細胞傳代

體外培養時,細胞在培養瓶中的生長過程主要分為 4 個階段(如下圖):

微信圖片_20221126110646.png

首先是延滯期,細胞接種到培養瓶后,起始的一段時間內是不增殖的,細胞數量保持不變。此階段,細胞需要時間來適應新的培養環境;另外,進行細胞分裂之前,細胞內各成分(例如遺傳物質)的復制與裝配等也需要時間。

過了延滯期后,細胞開始分裂,進入對數生長期。此階段,細胞數量急速增加。

細胞數量增加到一定程度時,細胞相互接觸,產生接觸抑制,細胞分裂生長速度減慢,直至完全停止生長,進入穩定期

進入穩定期后,由于培養基中營養物質消耗,有害代謝產物積聚,細胞死亡數逐漸增加,進入衰亡期

因此,為了避免大規模細胞死亡,細胞在進入穩定期時應及時消化,并重新接種到新的培養瓶中,這稱為細胞傳代。

從胎盤、臍帶和脂肪其他組織中分離干細胞進行培養,稱為原代培養,這一階段的細胞為原代細胞(0 代)。原代細胞充滿后,將細胞接種到新的培養瓶中,這是第 1 代。在第 1 代細胞長滿后,將細胞接種到新的培養瓶中,這是第 2 代;第 2 代細胞充滿后,將細胞接種到新的培養瓶中,即第 3 代細胞,依此類推。

胎盤間充質干細胞

足月胎盤是胎兒出生后的廢物,易于獲取,數量大,體積大,研究成本低,不涉及社會、倫理等問題。此外,胎盤間充質干細胞具有與骨髓間充質細胞相似的功能和特性,并且在增殖方面優于骨髓間充干細胞,可以大大增加間充質造血干細胞的數量。

1669603875864.png

一些研究分別測試了第 5、第 10 和第 15 代細胞的增殖能力。結果表明,第 5 代間充質干細胞的增殖能力顯著高于第 10 和第 15 代細胞。實驗結果表明,在體外培養胎盤間充質干細胞時,細胞會隨著細胞代次的增加而逐漸老化。由于第 5 代后胎盤干間充質細胞的增殖能力會逐漸下降,因此最好選擇第 5 代以下的間充質干細胞進行體外培養,作為臨床應用。

微信圖片_20221126111011.png

注:胎盤間充質干細胞鏡下形態

圖 A 為細胞貼壁后形態均一,呈長梭形,平行或漩渦狀生長(×100);

圖 B 為第 25 代細胞形態呈鋪路石樣改變(40×4)。

微信圖片_20221126111050.png

注:胎盤間充質干細胞生長曲線、增殖能力及傳代結果

圖 A 為第 5 代細胞的倍增時間明顯短于第 10 代和第 15 代細胞的倍增時間;

圖 B 為不同代次的胎盤間充質干細胞增殖能力不同,第 5 代增殖能力明顯高于第 10 和第 15 代,與第 5 代比,aP<0.01,bP<0.001,與第 10 代比,c<0.05;

圖 C 為胎盤間充質干細胞 5 例標本傳至 25 代,無貼壁細胞或貼壁不牢,但增殖速度快。

在這項研究中,胎盤間充質干細胞可以長期傳代培養到第 25 代。不同代次的胎盤間充質干細胞增殖能力不同,第 5 代的增殖能力顯著高于第 10 代和第 15 代,這表明在臨床應用前使用第 5 代是合適的

臍帶間充質干細胞

在各種來源的間充質干細胞中,人臍帶源性間充質細胞(hUC-MSCs)作為一種更“年輕”的成人間充質造血干細胞,因其綜合優勢而受到越來越多的關注

1669603777125.png

人臍帶間充質干細胞的基本生物學特性,如細胞表面免疫標記物和誘導的多潛能分化潛能,在長期體外培養后沒有顯著變化。長期培養 20 代后,未發現致病或致瘤基因變異。高傳代(P20)hUC-MSCs 與早期低傳代(P5)hUC-MSCs 的細胞增殖活性和端粒酶活性無顯著差異。隨著培養傳代次數的增加,細胞開始老化,尤其是第 20 代細胞

微信圖片_20221126110908.png

注:不同代次人臍帶間充質干細胞的形態學觀察

hUC-MSCs 在體外培養的第 5 代和第 10 代中顯示出相同的細胞形態和生長模式,顯示出長梭狀貼壁生長和輕微螺旋流動排列。第 20 代細胞表現出非常相似的長梭形貼壁生長,但細胞體略有擴大,融合后局部排列紊亂。

已經表明,盡管在高傳代培養中 hUC-MSCs 的核型保持穩定,但在第 7 代中端粒酶活性將下降。通過檢測人端粒酶逆轉錄酶活性亞基基因的表達,我們發現第 5 代、第 10 代和第 20 代 hUC- MSCs 的端粒酶活性沒有顯著差異;不同世代的細胞表現出相似的生長和增殖曲線,表明它們的細胞增殖活性沒有差異。

微信圖片_20221126110953.png

注:不同代次人臍帶間充質干細胞的增殖活性檢測

總之,盡管第 20 代 hUC-MSCs 仍然保持了與低代細胞相似的干細胞的生物學特性、基因穩定性和生長特性,但隨著傳代培養時間的延長,細胞開始顯示出一定程度的老化。鑒于過度傳代導致的 hUC-MSCs 老化跡象,建議用于臨床干細胞治療的 hUC-MSCs 體外培養不應超過第 10 代

脂肪間充質干細胞

脂肪間充質干細胞(ADSCs)是脂肪組織中的多能干細胞。它的免疫原性很低,體外擴增相對容易。這些優點使其在組織工程、創傷修復和基因治療中具有良好的應用前景。

1669604566191.png

在一些研究中,ADSCs 在體外培養至第 1、第 3、第 5、第 7、第 10、第 14 和第 15 代。結果發現,在 ADSCs 傳代至第 7 代后,細胞的增殖速率開始減慢,并且在 10 代后細胞的增殖速度顯著減慢。細胞呈長梭形,保持穩定。

微信圖片_20221126111203.png

注:細胞形態觀察

微信圖片_20221126111222.png

注:細胞因子定量分析

研究表明,脂肪來源的間充質干細胞(在無血清培養基中培養)的生物學和遺傳特性基本穩定,在傳代至第 5 代期間沒有顯著變化。初步揭示,脂肪來源的間充質干細胞在體外傳代至第 5 代后可以安全使用。

從上述研究中不難看出,間充質干細胞在理論上可以長期傳代培養,但在臨床應用中不建議選擇代次較高的干細胞。未在體外擴增的 MSCs 是安全無害的,除非它們有一些遺傳缺陷,否則體外擴增的最大風險是基因突變。一個研究團隊發現,當骨髓 MSC 在體外培養到第 18 代時,發生了基因突變和染色體異常。大量其他研究證實,只有當體外培養代數過高(超過 10 代)時,MSC 才會導致染色體異常。

影響干細胞回輸安全性的另一個問題是添加劑,例如使用無血清培養基代替動物血清進行培養;通過嚴格的無菌操作避免使用抗生素。然而,對于細胞培養中不可替代的成分,如胰蛋白酶,在回輸過程中嚴格檢查質量以確保沒有殘留成分也是至關重要的。

免責聲明:

我們尊重原創,也注重分享。圖文來源網絡,版權歸原作者所有,如涉及作品內容、版權或其它問題,請聯系我們刪除!

天歲生物十余年間已累計與橫跨近百行業的近千家客戶建立合作并提供細胞儲存、細胞藥物、藥物篩選、輔助生殖、抗衰研究等方面的服務,收獲廣泛好評。如果您有相關業務咨詢、課題合作等,請立即撥打咨詢電話: 18030162998,我們會為您詳細作答。專業顧問在線

天歲生物 · 更懂國人更放心

IT IS MORE REASSURING TO KNOW THE CHINESE PEOPLE

在線客服
聯系方式

電話

0592-6019366

郵箱

info@telocell.cn

顧問微信:

微信公眾號
在線留言